Sıçan Duyusal Nöronlarında KCl ve Kapsaisin ile İndüklenen Hücre İçi Kalsiyum Cevapları Üzerinde Silostazolun Etkisi

Ozcan, Mete; BURMA, Oktay; UYSAL, Ayhan; Kutlu, Selim; Kacar, Emine

Sıçan Duyusal Nöronlarında KCl ve Kapsaisin ile İndüklenen Hücre İçi Kalsiyum Cevapları Üzerinde Silostazolun Etkisi

Oktay BURMA, (Fırat Üniversitesi, Tıp Fakültesi, Göğüs Kalp ve Damar Cerrahisi Anabilim Dalı, Elazığ, Türkiye)

Mete ÖZCAN, (Fırat Üniversitesi, Tıp Fakültesi, Biyofizik Anabilim Dalı, Elazığ, Türkiye)

Emine KAÇAR, (Fırat Üniversitesi, Tıp Fakültesi, Fizyoloji Anabilim Dalı, Elazığ, Türkiye)

Ayhan UYSAL, (Fırat Üniversitesi, Tıp Fakültesi, Göğüs Kalp ve Damar Cerrahisi Anabilim Dalı, Elazığ, Türkiye)

Selim KUTLU (Necmettin Erbakan Üniversitesi, Meram Tıp Fakültesi, Fizyoloji Anabilim Dalı, Konya, Türkiye)

Fırat Üniversitesi Sağlık Bilimleri Tıp Dergisi

2 2

Yıl: 2014 Cilt: 28 Sayı: 1 Sayfa Aralığı: 25 - 28 Metin Dili: Türkçe İndeks Tarihi: 29-07-2022

Sıçan Duyusal Nöronlarında KCl ve Kapsaisin ile İndüklenen Hücre İçi Kalsiyum Cevapları Üzerinde Silostazolun Etkisi

Öz:

Amaç: Silostazol, spesifik cAMP fosfodiesteraz III inhibitorü olmakla birlikte medikal olarak bir periferik arter hastalığı olan intermitan klodikasyon tanılı hastalarda fiziksel aktivite esnasında bacakta meydana gelen ağrının giderilmesinde kullanılmaktır. Bu çalışmanın amacı, ağrı çalışmaları için uygun bir deneysel model olan sıçan dorsal kök gangliyonlarında (DKG) silostazolun hücre içi kalsiyum ([Ca+2]i) düzeyi üzerindeki etkisini belirlemekti. Gereç ve Yöntem: DKG nöronları 2 günlük Wistar cinsi sıçanlardan çeşitli enzimatik ve mekanik uygulamalarla elde edildi. DKG nöronları 1 ?mol Fura-2 AM boyasıyla boyanarak [Ca+2]iseviyesindeki değişimler oransal florasan yöntemle tespit edildi. Kültürde bulunan hücreler 340380 nm dalga boyunda uyarılıp 510 nm dalga boyunda kayıt yapıldı. Her bir nöronun 340/380 (bazal- pik) oranında bazal kalsiyum seviyesi tespit edildikten sonra kültür ortamına KCl (30 mM) ve kapsaisin (1 ?M) uygulandı. Silostazol tek başına veya KCl (30 mM) ve kapsaisin (1?M) ile birlikte kültür ortamına uygulanmasıyla küçük çapa sahip DKG nöronlarında meydana gelen [Ca+2]i değişimi incelendi. Elde edilen veriler Student's t-testi kullanılarak istatiksel olarak değerlendirildi ve P<0.05 istatistiki olarak anlamlı kabul edildi. Bulgular: Silostazol kültür ortamına öncelikle olarak tek başına uygulandı ve bu uygulama sonucunda hücre içi bazal Ca+2 seviyesinde anlamlı bir değişim gözlenmedi (bazal=100.0±0.0 ve silostazol =%99.8±0.8). Ortama KCl uygulanması [Ca+2]i seviyesini %190.3±6.2 seviyesine yükseltti (p<0.001). Kapsaisin uygulandığında ise [Ca+2]i seviyesi %165.6±4.1 değerine ulaştı (P<0.001). Bununla birlikte ortama KCl ve kapsaisin ile birlikte silostazol uygulandığında ise [Ca+2]i seviyesi sırası ile %189.4 ± 4.6 ve %166.0 ± 3.8 idi. Sonuç: Bu çalışmada ile silostazolün DKG nöronlarında [Ca+2]i düzeyinde herhangi bir değişime neden olmadığı belirlendi. Silostazol ağrı kesici etkisini muhtemelen hücre içi farklı mekanizmalarla gerçekleştirmektedir.

Anahtar Kelime:

Konular: Cerrahi

Effect of Cilostazol on KCl and Capsaicin Induced Increase in Intracellular Calcium Signaling in Rat Sensory Neurons

Öz:

Objective: Cilostazol, a specific cAMP phosphodiesterase III inhibitor, is used for medical treatment of intermittent claudication in peripheral artery disease to prevent leg pain during physical activity. Dorsal root ganglion (DRG) neurons are eligible experimental model for pain investigations. Aim of this study was to figure out the effect of cilostazol on intracellular calcium ([Ca2+]i) signaling in cultured rat DRG neurons. Materials and Methods: DRG neurons were grown in primary culture following enzymatic and mechanical dissociation of ganglia from 2-day-old Wistar rats. DRG neuronal cultures were loaded with 1?mol Fura-2AM and [Ca2+]i responses to stimulation were assessed by using fluorescent ratiometry. Cultured cells were excited at 340 and 380nm and emission was recorded at 510nm. Responses were determined by the change in 340/380 ratio (basal-peak) for individual neurons. After basal recordings, KCl (30mM) and capcaicin (1?M) applied to medium for induction of [Ca2+]i. Cilostazol treated alone or co-administered with KCl and capcaicin for determining the possible changes in calcium signaling in small size DRG neurons. Data were analyzed by using Student's t test, P level of <0.05 defining statistical significance. Results: Firstly exposure to cilostazol failed to cause any significant change in basal [Ca2+]i response (basal=100.0±0.0 and cilostazol =99.8±0.8 %). KCl and capcaicin had significant increase in [Ca2+]i responses to 190.3±6.2% and 165.6±4.1% (respectively, P< 0.001). But coapplication of cilostazol with KCl and capcaicin did not alter the KCl and capcaicin induced elevation in [Ca2+]i (189.4 ±% 4.6 and 166.0 ± 3.8% respectively). Conclusion: In conclusion, the results of present study suggest that cilostazol has no effect on [Ca2+]i signaling in rat sensory neurons in vitro. It seems cilostazol may activate other mechanism(s) at cellular level rather than modulating calcium signaling in DRG neurons.

Anahtar Kelime:

Konular: Cerrahi

Belge Türü: Makale Makale Türü: Araştırma Makalesi Erişim Türü: Erişime Açık

Whayne TF. A Review of the role of anticoagulation in the treatment of peripheral arterial disease. Int J Angiol 2012; 21: 187-194.
Criqui MH, Fronek A, Barrett-Connor E, et al. The prevalence of peripheral arterial disease in a defined population. Circulation 1985; 71: 510-515.
Criqui MH, Denenberg JO, Langer RD, Fronek A. The epidemiology of peripheral arterial disease: Importance of identifying the population at risk. Vasc Med 1997; 2: 221- 226.
Schainfeld RM. Management of peripheral arterial disease and intermittent claudication J Am Board Fam Prac 2001; 14: 443-450.
Hankey GJ, Norman PE, Eikelboom JW. Medical treatment of peripheral arterial disease. JAMA 2006; 295: 547-553.
Kawanabe Y, Takahashi M, Jin X, et al. Cilostazol prevents endothelin-induced smooth muscle constriction and proliferation. PLoS One 2012; 7: 44476.
Sallustio F, Rotondo F, Di Legge S, Stanzione P. Cilostazol in the management of atherosclerosis. Curr Vasc Pharmacol 2010; 8: 363-372.
Almeida TF, Roizenblatt S, Tufik S. Afferent pain pathways: a neuroantomical review. Brain Res 2004; 1000: 40-56.
Devor M, Janig W, Michaelis M. Modulation of activity in dorsal root ganglion neurons by sympathetic activation in nerve-injured rats. J Neurophysiol 1994; 71: 38-47.
Devor M. The pathophysiology of damaged peripheral nerves. Textbook of Pain. 3rd Edition. Wall PD, Melzack, R. (Editors). Churchill Livingstone, Edinburgh, 1994; 79-101.
Moldovan M, Alvarez S, Romer Rosberg M, Krarup C. Axonal voltage-gated ion channels as pharmacological targets for pain. Eur J Pharmacol 2013; 708:105-112.
Harper AA, Lawson SN. Conduction velocity is related to morphological cell type in rat dorsal root ganglion neurons. J Physiol 1985; 359: 31-46.
Miller RJ. The control of neuronal Ca2+ homeostasis. Prog Neurobiol 1991; 37: 255-285
Ozcan M, Ayar A, Serhatlioglu I, et al. Orexins activates protein kinase C-mediated Ca(2+) signaling in isolated rat primary sensory neurons. Physiol Res 2010; 59: 255-262.
Özcan M, Alçin E, Kuzgun KT, Keleştimur H, Ayar A. Sıçan duyusal sinir hücresi alt tiplerinde kalsiyum sinyallerinin incelenmesi: Kapsaisin duyarlılığı, nonspesifik depolarizasyon ve hücre çapı arasındaki ilişki. Turkiye Klinikleri J Med Sci 2010; 30: 544-552.
Kimura Y, Tani T, Kanabe T, Watanabe K. Effect of cilostazol on platelet aggregation and experimental thrombosis. Arzneimittelforschung 1985; 35: 1144-1149.
Tanaka K, Gotoh F, Fukuuchi Y, et al. Effects of a selective inhibitor of cyclic AMP phosphodiesterase on the pial microcirculation in feline cerebral ischemia. Stroke 1989; 20: 668-673.
Xu W, Liu Y, Wang S, et al. Cytoprotective role of Ca2+- activated K+ channels in the cardiac inner mitochondrial membrane. Science 2002; 298: 1029-1033.
Sato T, Saito T, Saegusa N, Nakaya H. Mitochondrial Ca2+- activated K+ channels in cardiac myocytes: a mechanism of the cardioprotective effect and modulation by protein kinase A. Circulation 2005; 111: 198-203.
O'Rourke B. Mitochondrial ion channels. Annu Rev Physiol 2007; 69: 19-49.
Wu SN, Liu SI, Huang MH. Cilostazol, an inhibitor of type 3 phosphodiesterase, stimulates large-conductance, calcium- activated potassium channels in pituitary GH3 cells and pheochromocytoma PC12 cells. Endocrinology 2004;145: 1175-1184.

APA	BURMA O, Ozcan M, Kacar E, UYSAL A, Kutlu S (2014). Sıçan Duyusal Nöronlarında KCl ve Kapsaisin ile İndüklenen Hücre İçi Kalsiyum Cevapları Üzerinde Silostazolun Etkisi. , 25 - 28.
Chicago	BURMA Oktay,Ozcan Mete,Kacar Emine,UYSAL Ayhan,Kutlu Selim Sıçan Duyusal Nöronlarında KCl ve Kapsaisin ile İndüklenen Hücre İçi Kalsiyum Cevapları Üzerinde Silostazolun Etkisi. (2014): 25 - 28.
MLA	BURMA Oktay,Ozcan Mete,Kacar Emine,UYSAL Ayhan,Kutlu Selim Sıçan Duyusal Nöronlarında KCl ve Kapsaisin ile İndüklenen Hücre İçi Kalsiyum Cevapları Üzerinde Silostazolun Etkisi. , 2014, ss.25 - 28.
AMA	BURMA O,Ozcan M,Kacar E,UYSAL A,Kutlu S Sıçan Duyusal Nöronlarında KCl ve Kapsaisin ile İndüklenen Hücre İçi Kalsiyum Cevapları Üzerinde Silostazolun Etkisi. . 2014; 25 - 28.
Vancouver	BURMA O,Ozcan M,Kacar E,UYSAL A,Kutlu S Sıçan Duyusal Nöronlarında KCl ve Kapsaisin ile İndüklenen Hücre İçi Kalsiyum Cevapları Üzerinde Silostazolun Etkisi. . 2014; 25 - 28.
IEEE	BURMA O,Ozcan M,Kacar E,UYSAL A,Kutlu S "Sıçan Duyusal Nöronlarında KCl ve Kapsaisin ile İndüklenen Hücre İçi Kalsiyum Cevapları Üzerinde Silostazolun Etkisi." , ss.25 - 28, 2014.
ISNAD	BURMA, Oktay vd. "Sıçan Duyusal Nöronlarında KCl ve Kapsaisin ile İndüklenen Hücre İçi Kalsiyum Cevapları Üzerinde Silostazolun Etkisi". (2014), 25-28.

APA	BURMA O, Ozcan M, Kacar E, UYSAL A, Kutlu S (2014). Sıçan Duyusal Nöronlarında KCl ve Kapsaisin ile İndüklenen Hücre İçi Kalsiyum Cevapları Üzerinde Silostazolun Etkisi. Fırat Üniversitesi Sağlık Bilimleri Tıp Dergisi, 28(1), 25 - 28.
Chicago	BURMA Oktay,Ozcan Mete,Kacar Emine,UYSAL Ayhan,Kutlu Selim Sıçan Duyusal Nöronlarında KCl ve Kapsaisin ile İndüklenen Hücre İçi Kalsiyum Cevapları Üzerinde Silostazolun Etkisi. Fırat Üniversitesi Sağlık Bilimleri Tıp Dergisi 28, no.1 (2014): 25 - 28.
MLA	BURMA Oktay,Ozcan Mete,Kacar Emine,UYSAL Ayhan,Kutlu Selim Sıçan Duyusal Nöronlarında KCl ve Kapsaisin ile İndüklenen Hücre İçi Kalsiyum Cevapları Üzerinde Silostazolun Etkisi. Fırat Üniversitesi Sağlık Bilimleri Tıp Dergisi, vol.28, no.1, 2014, ss.25 - 28.
AMA	BURMA O,Ozcan M,Kacar E,UYSAL A,Kutlu S Sıçan Duyusal Nöronlarında KCl ve Kapsaisin ile İndüklenen Hücre İçi Kalsiyum Cevapları Üzerinde Silostazolun Etkisi. Fırat Üniversitesi Sağlık Bilimleri Tıp Dergisi. 2014; 28(1): 25 - 28.
Vancouver	BURMA O,Ozcan M,Kacar E,UYSAL A,Kutlu S Sıçan Duyusal Nöronlarında KCl ve Kapsaisin ile İndüklenen Hücre İçi Kalsiyum Cevapları Üzerinde Silostazolun Etkisi. Fırat Üniversitesi Sağlık Bilimleri Tıp Dergisi. 2014; 28(1): 25 - 28.
IEEE	BURMA O,Ozcan M,Kacar E,UYSAL A,Kutlu S "Sıçan Duyusal Nöronlarında KCl ve Kapsaisin ile İndüklenen Hücre İçi Kalsiyum Cevapları Üzerinde Silostazolun Etkisi." Fırat Üniversitesi Sağlık Bilimleri Tıp Dergisi, 28, ss.25 - 28, 2014.
ISNAD	BURMA, Oktay vd. "Sıçan Duyusal Nöronlarında KCl ve Kapsaisin ile İndüklenen Hücre İçi Kalsiyum Cevapları Üzerinde Silostazolun Etkisi". Fırat Üniversitesi Sağlık Bilimleri Tıp Dergisi 28/1 (2014), 25-28.