Mikroskop İncelemesi Negatif Olan Şüpheli Kronik Kutanöz Leishmania Olgularının Polimeraz Zincir Reaksiyonu Yöntemi ile Araştırılması
Yıl: 2019 Cilt: 53 Sayı: 4 Sayfa Aralığı: 408 - 418 Metin Dili: Türkçe DOI: 10.5578/mb.68692 İndeks Tarihi: 16-11-2020
Mikroskop İncelemesi Negatif Olan Şüpheli Kronik Kutanöz Leishmania Olgularının Polimeraz Zincir Reaksiyonu Yöntemi ile Araştırılması
Öz: Leyşmanyazis, enfekte dişi tatarcıkların ısırmasıyla insanlara bulaşan paraziter bir hastalıktır. Kutanözleyşmanyazisin (KL) tanısında dermal kazıntıdan alınan örneklerde, mikroskopta parazitin gösterilmesialtın standart bir yöntem olarak yerini korumaktadır. Ancak bir yıl ve daha uzun süreli lezyonu bulunankronik olgularda amastigot sayısı çok az sayıda olduğundan saptamak zordur. Hastaların öncelikle vücutlarında çıkan bu lezyonları dikkate almamaları, sağlık kurumlarına başvurmamaları veya geç başvurmaları,yanlış tedavi almaları gibi birçok nedenden ötürü tanı ve tedavi gecikmektedir. Ayrıca, lezyonlar üzerinesekonder enfeksiyon eklenerek prognoz kötüleşmekte ve yaralar kronikleşmektedir. Bu nedenle, kronikKL şüpheli olgularda mikroskop ile inceleme yöntemine ek olarak moleküler yöntemlerden faydalanılmaktadır. Bu çalışmada, mikroskop incelemesi sonucunda Leishmania amastigotları görülmeyen ancakklinik olarak KL açısından değerlendirilmesi rapor edilmiş şüpheli kronik KL Türkiye başlangıçlı olgulara aitdermal kazıntı preparatları seçilerek polimeraz zincir reaksiyonu (PCR) yöntemi kullanılarak leyşmanyazistanısında moleküler yöntemin tanı değerinin ortaya konması amaçlanmıştır. Hatay Mustafa Kemal Üniversitesi Tıp Fakültesi Parazitoloji Laboratuvarına farklı polikliniklerden gelen KL şüphesi ile başvurmuş vemikroskop incelemesi sonucunda endemik bölgelerden geldikleri kaydedilmiş (Hassa, Altınözü, Yayladağı gibi), klinik olarak kronik KL açısından değerlendirilmesi rapor edilmiş Türk hastaya ait dermal kazıntıpreparatları (n= 50) çalışmaya dahil edilmiştir. Örneklerden DNA izolasyonu yapılarak tüm Leishmaniatürlerine özgü kinetoplastit DNA (kDNA) bölgesini hedefleyen 13A, 13B primerleri kullanılmıştır. PCR ilepozitif bulunan örnekler internal transcribed spacer (ITS-1) bölgesini hedefleyen LITSR ve L5.8S primerlerikullanılarak “polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism (PCR-RFLP)” yöntemiile tür tayini yapılmıştır. Toplam 50 adet dermal kazıntı örneğinden 17 (%34)’si kDNA bölgesini hedefleyen 13A, 13B primerleri ile pozitif olarak bulunmuştur. Pozitif bulunan örnekler ITS-1 bölgesini hedefleyenLITSR ve L5.8S primerleri ile de pozitif olarak saptanmıştır. ITS-1 gen bölgesiyle yapılan PCR sonucundaelde edilen ürünler BsuRI (HaeIII) enzimi kullanılarak kesilmiştir. PCR-RFLP analizi sonucunda 17 örneğin11’i Leishmania tropica, biri Leishmania major ve beşi Leishmania infantum/donovani olarak tanımlanmıştır.Kronik KL; sarkoidoz, tüberküloz, malign tümörler gibi deri hastalıklarıyla karışabilmektedir. Özellikle,kronik KL olguları doğru tanı konulamaması, mikroskop deneyiminin yeterli olmaması, parazit sayısınınaz olması nedeniyle görülememesi gibi pek çok sebepten gözden kaçabilmektedir. Bu nedenle kronik KLşüphesi olan ancak mikroskop inceleme yöntemi ile parazit saptanamayan örneklerde moleküler yöntemolan PCR’nin kullanılmasının gerektiği sonucuna varılmıştır.
Anahtar Kelime: Investigation of Polymerase Chain Reaction Method in Patients with Suspected Chronic Cutaneous Leishmania of Negative Microscopy
Öz: Leishmaniasis is a parasitic disease that is transmitted to humans by the bites of infected female phlebotomine sandflies. In the diagnosis of cutaneous leishmaniasis (CL), in the smear samples, the demonstration of the parasite by microscope remains a gold standard method. However, it becomes difficult to diagnose the parasite since the number of amastigotes in chronic cases with a lesion of one year or longer is very low. Due to many factor such as patients primarily do not to take any notice these lesions in their bodies, do not apply to health institutions or late applied, receive wrong treatment; the diagnosis and treatment are delayed. In addition, it is been worse prognosis by add secondary infection to lesions and wounds become chronic. For this reason, molecular methods are used in addition to microscopic examination in chronic suspected CL cases. It was aimed to reveal of the molecular diagnostic value in chronic suspected CL cases by polymerase chain reaction (PCR) in the smear belonging to Turkish patients that reported to be evaluated clinically because it can not be seen Leishmania amastigotes in microscopic examination. Smear of 50 Turkish patients who were clinically reported of the evaluation of chronic CL were selected. These samples were smears belonging to suspected CL patients that applied Hatay Mustafa Kemal University, Faculty of Medicine, Parasitology laboratory from different polyclinics and were decided to be evaluated clinically as a result of microscopic examination because they came from endemic regions (such as Hassa, Altınözü, Yayladağı). DNA was isolated from selected samples and PCR was performed using 13A, 13B primers targeting the kinetoplastid DNA (kDNA) region. The samples found positive by PCR were typed by polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism (PCR-RFLP) analysis using LITSR and L5.8S primers targeting internal transcribed spacer (ITS-1) region. Of the 50 smear samples, 17 (34%) were determined positive with 13A, 13B primers targeting the kinetoplastid DNA (kDNA) region. Positive samples were also found to be positive with LITSR and L5.8S primers targeting ITS-1 region. The PCR products obtained from PCR with ITS-1 gene region were digested with the restriction endonucleases BsuRI (HaeIII). As a result of PCR-RFLP analysis, it was determined that 11 of Leishmania tropica, one of Leishmania major and five of Leishmania infantum/donovani out of 17 samples. Chronic CL can be confused with skin diseases such as sarcoidosis, tuberculosis, malignant tumors. In particular, chronic CL cases can be escaped the attention for many reasons such as failure to diagnose correctly, insufficient microscope experience, fail to see due to low number of parasites. For this reason, it was concluded that PCR, which is a molecular method, should be used in chronic suspected CL samples which are negative for the parasite by microscopic examination.
Anahtar Kelime: Belge Türü: Makale Makale Türü: Araştırma Makalesi Erişim Türü: Bibliyografik
- 1. World Health Organization (2010) Control of the Leishmaniases. In: WHO Technical Report Series 949: report of a meeting of the WHO Expert Committee on the Control of Leishmaniases, Geneva, 22–26 March 2010. World Health Organization, Geneva. http://whqlibdoc.who.int/trs/WHO_TRS_949_eng.pdf
- 2. Karakavuk M, Aykur M, Ünver A, Döskaya M. Parasitic diseases that can infect travelers to Africa. Turk J Parasitol 2018;42(2):154-61.
- 3. World Health Organization. Sustaining the drive to overcome the global impact of neglected tropical diseases, second who report on neglected tropical diseases. 2013;67-71.
- 4. Gürel MS, Yeşilova Y, Ölgel MK, Özbel Y. Cutaneous leishmaniasis in Turkey. Türkiye Parazitol Derg 2012;36(2):121-9.
- 5. Harman M. Leishmaniasis. Turk J Dermatol 2015;9:168-76.
- 6. Uzun S, Uslular C, Yucel A, Acar MA, Ozpoyraz M, Memişoğlu HR. Cutaneous leishmaniasis: evaluation of 3074 cases in the Cukurova region of Turkey. Br J Dermatol 1999;140:347-50.
- 7. Uzun S, Gürel MS, Harman M. Kutanöz layşmanyazis tanı ve tedavi rehberi. Türk Dermatoloji Derneği, Haziran 2017. Galenos Yayınevi, İstanbul, Türkiye.
- 8. Akçalı C, Çulha G, İnalöz S, Savaş N, Önlen Y, Savaş L, et al. Cutaneous leishmaniasis in Hatay. J Turk Acad Dermatol 2007;1(1):1-5.
- 9. Çulha G, Doğramacı ÇA, Gülkan B, Savaş N. Kutanöz leishmaniasis ve Hatay ilindeki durumu. Türk Hijyen ve Deneysel Biyoloji Dergisi 2014;71(4):171-8.
- 10. Yaman M, Özbel Y. The sandflies (Diptera: Psychodidae) in the Turkish province of Hatay: some possible vectors of the parasites causing human cutaneous leishmaniasis. Annals of Tropical Medicine & Parasitology 2004;98(7):741-50.
- 11. Toz SO, Nasereddin A, Ozbel Y, Ertabaklar H, Culha G, Sevil N, et al. Leishmaniasis in Turkey: molecular characterization of Leishmania from human and canine clinical samples. Trop Med Int Health 2009;14(11):1401-6.
- 12. Özbilgin A, Çulha G, Uzun S, Harman M, Topal SG, Okudan F, et al. Leishmaniasis in Turkey: first clinical isolation of Leishmania major from 18 autochthonous cases of cutaneous leishmaniasis in four geographical regions. Trop Med Int Health 2016;21(6):783-91.
- 13. Culha G, Dogramaci AÇ, Kaya T, Çavuş İ, Gülkan B, Özbilgin A. Imported cutaneous leishmaniasis cases detected in truck drivers in Hatay. Mikrobiyol Bul 2018;52(3):316-23.
- 14. Alan S, Başsorgun Cİ. Tanıda gecikilmiş ve yüzde geniş skar bırakmış bir kutanöz leishmania olgusu. Abant Med J 2015;4(1):76-8.
- 15. Mohaghegh MA, Fata A, Salehi GH, Berenji F. Molecular identification of Leishmania species using samples obtained from negative stained smears. Iranian J Parasitol 2013;8(2):337.
- 16. Kazemi-Rad E, Mohebali M, Hajjaran H, Rezaei S, Mamishi S. Diagnosis and characterization of Leishmania species in Giemsa-stained slides by PCR-RFLP. Iranian J Publ Health 2008;37(1):54-60.
- 17. Rodrigues EH, Felinto de Brito ME, Mendonça MG, Werkhäuser RP, Coutinho EM, et al. Evaluation of PCR of American cutaneous leishmaniasis in an area of endemicity in northeastern Brazil. J Clin Microbiol 2002;40:3572-6.
- 18. Culha G, Uzun S, Ozcan K, Memisoglu HR, Chang KP. Comparison of conventional and polymerase chain reaction diagnostic techniques for leishmaniasis in the endemic region of Adana, Turkey. Int J Dermatol 2006;45(5):569-72.
- 19. Ertabaklar H, Çalışkan S. Ö, Boduç E, Ertuğ S. Kutanöz leyşmanyazis tanısında direkt mikroskopi, kültür ve polimeraz zincir reaksiyonu yöntemlerinin karşılaştırılması. Mikrobiyol Bul 2015;49(1):77-84.
- 20. Mouttaki T, Morales-Yuste M, Merino-Espinosa G, Chiheb S, Fellah H, Martin-Sanchez J, Riyad M. Molecular diagnosis of cutaneous leishmaniasis and identification of the causative Leishmania species in Morocco by using three PCR-based assays. Parasites Vectors 2014;7(1):420.
- 21. Ertabaklar H, Ertuğ S, Çalışkan SÖ, Bozdoğan B. Determination of Leishmania species by PCR-RFLP in the smear samples taken from the lesions of cutaneous leishmaniasis cases. Mikrobiyol Bul 2016;50(2):300-6.
- 22. Kumar R, Bumb RA, Ansari NA, Mehta RD, Salotra P. Cutaneous leishmaniasis caused by Leishmania tropica in Bikaner, India: parasite identification and characterization using molecular and immunologic tools. Am J Trop Med Hyg 2007;76(5):896-901.
- 23. Akkafa F, Dilmec F, Alpua Z. Identification of Leishmania parasites in clinical samples obtained from cutaneous leishmaniasis patients using PCR-RFLP technique in endemic region, Sanliurfa Province, in Turkey. Parasitol Research 2008;103(3):583.
- 24. Hajjaran H, Vasigheh F, Mohebali M, Rezaei S, Mamishi S, Charedar S. Direct diagnosis of Leishmania species on serosity materials punctured from cutaneous leishmaniasis patients using PCR-RFLP. J Clin Lab Anal 2011;25(1):20-4.
- 25. Mohaghegh M, Fata A, Salehi G, Berenji F, Bazzaz MM, Rafatpanah H, et al. Molecular identification of Leishmania species using samples obtained from negative stained smears. Iran J Parasitol 2013;8(2):337-41.
- 26. El-Badry AA, El-Dwibe H, Basyoni MM, Al-Antably AS, Al-Bashier WA. Molecular prevalence and estimated risk of cutaneous leishmaniasis in Libya. J Microbiol, Immunol Infect 2017;50(6):805-10.
- 27. Culha G, Akyar I, Yildiz Zeyrek F, Kurt Ö, Gündüz C, Özensoy Töz S, et al. leishmaniasis in Turkey: determination of Leishmania species by matrix-assisted laser desorption ionization time-of-flight mass spectrometry (MALDI-TOF MS). ran J Parasitol 2014;9(2):239-48.
- 28. http://cografyaharita.com/turkiye_mulki_idare_haritalari3.html.
APA | Çulha G, KAYA T, Gulbol Duran G, Urhan Küçük M, DOĞRAMACI A, Celik D (2019). Mikroskop İncelemesi Negatif Olan Şüpheli Kronik Kutanöz Leishmania Olgularının Polimeraz Zincir Reaksiyonu Yöntemi ile Araştırılması. , 408 - 418. 10.5578/mb.68692 |
Chicago | Çulha Gülnaz,KAYA TUGBA,Gulbol Duran Gulay,Urhan Küçük Meral,DOĞRAMACI ASENA ÇİĞDEM,Celik Dilek Mikroskop İncelemesi Negatif Olan Şüpheli Kronik Kutanöz Leishmania Olgularının Polimeraz Zincir Reaksiyonu Yöntemi ile Araştırılması. (2019): 408 - 418. 10.5578/mb.68692 |
MLA | Çulha Gülnaz,KAYA TUGBA,Gulbol Duran Gulay,Urhan Küçük Meral,DOĞRAMACI ASENA ÇİĞDEM,Celik Dilek Mikroskop İncelemesi Negatif Olan Şüpheli Kronik Kutanöz Leishmania Olgularının Polimeraz Zincir Reaksiyonu Yöntemi ile Araştırılması. , 2019, ss.408 - 418. 10.5578/mb.68692 |
AMA | Çulha G,KAYA T,Gulbol Duran G,Urhan Küçük M,DOĞRAMACI A,Celik D Mikroskop İncelemesi Negatif Olan Şüpheli Kronik Kutanöz Leishmania Olgularının Polimeraz Zincir Reaksiyonu Yöntemi ile Araştırılması. . 2019; 408 - 418. 10.5578/mb.68692 |
Vancouver | Çulha G,KAYA T,Gulbol Duran G,Urhan Küçük M,DOĞRAMACI A,Celik D Mikroskop İncelemesi Negatif Olan Şüpheli Kronik Kutanöz Leishmania Olgularının Polimeraz Zincir Reaksiyonu Yöntemi ile Araştırılması. . 2019; 408 - 418. 10.5578/mb.68692 |
IEEE | Çulha G,KAYA T,Gulbol Duran G,Urhan Küçük M,DOĞRAMACI A,Celik D "Mikroskop İncelemesi Negatif Olan Şüpheli Kronik Kutanöz Leishmania Olgularının Polimeraz Zincir Reaksiyonu Yöntemi ile Araştırılması." , ss.408 - 418, 2019. 10.5578/mb.68692 |
ISNAD | Çulha, Gülnaz vd. "Mikroskop İncelemesi Negatif Olan Şüpheli Kronik Kutanöz Leishmania Olgularının Polimeraz Zincir Reaksiyonu Yöntemi ile Araştırılması". (2019), 408-418. https://doi.org/10.5578/mb.68692 |
APA | Çulha G, KAYA T, Gulbol Duran G, Urhan Küçük M, DOĞRAMACI A, Celik D (2019). Mikroskop İncelemesi Negatif Olan Şüpheli Kronik Kutanöz Leishmania Olgularının Polimeraz Zincir Reaksiyonu Yöntemi ile Araştırılması. Mikrobiyoloji Bülteni, 53(4), 408 - 418. 10.5578/mb.68692 |
Chicago | Çulha Gülnaz,KAYA TUGBA,Gulbol Duran Gulay,Urhan Küçük Meral,DOĞRAMACI ASENA ÇİĞDEM,Celik Dilek Mikroskop İncelemesi Negatif Olan Şüpheli Kronik Kutanöz Leishmania Olgularının Polimeraz Zincir Reaksiyonu Yöntemi ile Araştırılması. Mikrobiyoloji Bülteni 53, no.4 (2019): 408 - 418. 10.5578/mb.68692 |
MLA | Çulha Gülnaz,KAYA TUGBA,Gulbol Duran Gulay,Urhan Küçük Meral,DOĞRAMACI ASENA ÇİĞDEM,Celik Dilek Mikroskop İncelemesi Negatif Olan Şüpheli Kronik Kutanöz Leishmania Olgularının Polimeraz Zincir Reaksiyonu Yöntemi ile Araştırılması. Mikrobiyoloji Bülteni, vol.53, no.4, 2019, ss.408 - 418. 10.5578/mb.68692 |
AMA | Çulha G,KAYA T,Gulbol Duran G,Urhan Küçük M,DOĞRAMACI A,Celik D Mikroskop İncelemesi Negatif Olan Şüpheli Kronik Kutanöz Leishmania Olgularının Polimeraz Zincir Reaksiyonu Yöntemi ile Araştırılması. Mikrobiyoloji Bülteni. 2019; 53(4): 408 - 418. 10.5578/mb.68692 |
Vancouver | Çulha G,KAYA T,Gulbol Duran G,Urhan Küçük M,DOĞRAMACI A,Celik D Mikroskop İncelemesi Negatif Olan Şüpheli Kronik Kutanöz Leishmania Olgularının Polimeraz Zincir Reaksiyonu Yöntemi ile Araştırılması. Mikrobiyoloji Bülteni. 2019; 53(4): 408 - 418. 10.5578/mb.68692 |
IEEE | Çulha G,KAYA T,Gulbol Duran G,Urhan Küçük M,DOĞRAMACI A,Celik D "Mikroskop İncelemesi Negatif Olan Şüpheli Kronik Kutanöz Leishmania Olgularının Polimeraz Zincir Reaksiyonu Yöntemi ile Araştırılması." Mikrobiyoloji Bülteni, 53, ss.408 - 418, 2019. 10.5578/mb.68692 |
ISNAD | Çulha, Gülnaz vd. "Mikroskop İncelemesi Negatif Olan Şüpheli Kronik Kutanöz Leishmania Olgularının Polimeraz Zincir Reaksiyonu Yöntemi ile Araştırılması". Mikrobiyoloji Bülteni 53/4 (2019), 408-418. https://doi.org/10.5578/mb.68692 |