Hepatit B Virüsüne (HBV) Karşı Doğal Bağışık,Kronik HBV Enfeksiyonu Olan ve HBV ileKarşılaşmamış Bireylerdeki “Stimulator of Interferon Genes (STING)” mRNA Düzeylerinin Karşılaştırılması

Buruk, Kurtulus; Özkaya, Esra; Aydın, Faruk; AYDIN KASAP, ZELIHA; KAKLIKKAYA, NESE; KASAP, Bünyamin

doi:10.5578/mb.68787

Hepatit B Virüsüne (HBV) Karşı Doğal Bağışık,Kronik HBV Enfeksiyonu Olan ve HBV ileKarşılaşmamış Bireylerdeki “Stimulator of Interferon Genes (STING)” mRNA Düzeylerinin Karşılaştırılması

Bünyamin KASAP, (Sağlık Bilimleri Üniversitesi, Trabzon Kanuni Eğitim ve Araştırma Hastanesi, Tıbbi Mikrobiyoloji Laboratuvarı, Trabzon, Türkiye)

Celal Kurtuluş BURUK, (Karadeniz Teknik Üniversitesi, Tıp Fakültesi, Tıbbi Mikrobiyoloji Anabilim Dalı, Trabzon, Türkiye)

Neşe KAKLIKKAYA, (Karadeniz Teknik Üniversitesi, Tıp Fakültesi, Tıbbi Mikrobiyoloji Anabilim Dalı, Trabzon, Türkiye)

Esra ÖZKAYA, (Karadeniz Teknik Üniversitesi, Tıp Fakültesi, Tıbbi Mikrobiyoloji Anabilim Dalı, Trabzon, Türkiye)

Zeliha AYDIN KASAP, (Karadeniz Teknik Üniversitesi, Sağlık Bilimleri Enstitüsü, Biyoistatistik ve Tıp Bilişimi Anabilim Dalı, Trabzon, Türkiye)

Faruk AYDIN (Karadeniz Teknik Üniversitesi, Tıp Fakültesi, Tıbbi Mikrobiyoloji Anabilim Dalı, Trabzon, Türkiye)

Mikrobiyoloji Bülteni

23 0

Yıl: 2020 Cilt: 54 Sayı: 1 Sayfa Aralığı: 66 - 78 Metin Dili: Türkçe DOI: 10.5578/mb.68787 İndeks Tarihi: 05-05-2021

Hepatit B Virüsüne (HBV) Karşı Doğal Bağışık,Kronik HBV Enfeksiyonu Olan ve HBV ileKarşılaşmamış Bireylerdeki “Stimulator of Interferon Genes (STING)” mRNA Düzeylerinin Karşılaştırılması

Öz:

Tüm dünyada yaklaşık 350-400 milyon kişinin kronik olarak hepatit B virüsü (HBV) ile enfekte olduğu ve her yıl yaklaşık bir milyon kişinin de HBV ile ilişkili hastalıklar nedeniyle hayatını kaybettiği tahmin edilmektedir. Enfeksiyonun kronikleşmesinde virüse ve konağa ait faktörlerin, özellikle de konağın bağışıklık sisteminin rol oynadığı ileri sürülmektedir. “Stimulator of interferon genes (STING)” hücre içindeki DNA varlığını algılayarak çeşitli sitokinlerin sentezini artıran “patern tanıma reseptörü (PRR)’’ ailesinin bir üyesi olup, bu proteinin HBV enfeksiyonuna karşı bağışıklık sisteminin önemli bir elemanı olabileceği düşünülmektedir. Bireylerde STING ekspresyonundaki farklılıklar ile HBV’nin kronikleşmesi arasında bir ilişkinin olabileceği varsayılarak kurgulanan bu çalışma, HBV’ye karşı doğal bağışık bireylerde, kronik hepatit B hastalarında ve HBV ile karşılaşmamış normal popülasyonda yer alan bireylerde STING gen ekspresyon düzeyinin araştırılması amacıyla yapılmıştır. Çalışmaya 18-65 yaş aralığında HBV’ye karşı doğal bağışık birinci gruptan 30 kişi, kronik hepatit B hastası ikinci gruptan 30 kişi ve HBV ile karşılaşmamış normal popülasyondaki üçüncü gruptan 30 kişi olmak üzere toplam 90 kişi dahil edilmiştir. Her bir katılımcıdan tam kan örneği alınıp periferik kan mononükleer hücreleri (PKMNH) izole edilmiştir. Elde edilen PKMNH’den total RNA izolasyonu gerçekleştirilmiştir. İzole edilen total RNA’dan cDNA sentezi gerçekleştirildikten sonra STING gen ekspresyon düzeyi gerçek zamanlı polimeraz zincir reaksiyonu (Rt-PCR) yöntemiyle belirlenmiştir. Rt-PCR işleminden sonra 2-ΔΔCT formülü uygulanarak normalizasyon işlemi gerçekleştirilmiştir. Çalışmaya katılan HBV’ye karşı doğal bağışık bireylerden oluşan grubun STING ekspresyon düzeylerinin ortalaması 0.084 ± 0.026, HBV ile karşılaşmamış bireylerden oluşan grubun STING ekspresyon düzeylerinin ortalaması 0.082 ± 0.032, kronik hepatit B hastalarından oluşan grubun STING ekspresyon düzeylerinin ortalaması ise 0.075 ± 0.022 olarak bulunmuştur. İstatistiksel olarak gruplar arasında anlamlı fark tespit edilmemiştir (p> 0.05). Literatür taramasına göre, çalışmamız HBV enfeksiyonunun kronikleşmesinde STING ekspresyon düzeyinin araştırıldığı ilk çalışmadır. İstatistiksel olarak anlamlı fark bulunamamasına rağmen, doğal bağışık bireylerdeki STING ekspresyon düzeylerinin kronik hepatit B hastalarındaki STING ekspresyon düzeylerinden yaklaşık %10 oranında daha fazla bulunması önemli bir bulgu olarak değerlendirilmiştir.

Anahtar Kelime:

Comparison of mRNA Levels of Stimulator of Interferon Genes (STING) in Individuals with Natural Immunity to Hepatitis B Virus (HBV), and in those with Chronic Hepatitis B Infection and without HBV

Öz:

It has been estimated that currently 350-400 million people have been chronically infected with the hepatitis B virus (HBV) worldwide and approximately one million people die each year due to HBV rela ted diseases. It has been suggested that the viral and host factors, especially the host immune system, may play a role in the chronicity of the HBV infection. Stimulator of interferon genes (STING) is one ofthe members of the pattern recognition receptor (PRR) that detects the presence of DNA in a human cell, activate synthesis of various cytokines and this protein is thought to be an important member of the immune system against HBV infection. Based on the assumption that there may be a relationship between the differences of STING expression in individuals and HBV chronicity, the aim of this study was to investigate STING gene expression levels in individuals naturally immunized against HBV, in chronic hepatitis B infected patients and in normal individuals who have not been exposed to HBV. A total of 90 volunteers have been included in the study from the age range of 18 to 65, in which the first group consists of 30 individuals naturally immunized against HBV, the second group consists of 30 chronically hepatitis B infected patients while the third group consists of 30 healthy population members who have not been exposed to HBV. Whole blood samples were taken from each participant and peripheral blood mononuclear cells (PBMC) were isolated afterwards. Total RNA was isolated from PBMC. After the synthesis of cDNA from the total RNA, STING gene expression levels were determined by real time polymerase chain reaction (Rt-PCR) method. Normalization was performed by applying the 2-ΔΔCT for mula after Rt-PCR procedure. STING expression level of the naturally immunized group was calculatedas 0.084 ± 0.026 on average, average STING expression level of healthy population group was 0.082 ± 0.032 and STING expression level of chronically infected patients group was 0.075 ± 0.022 on average. There was no statistically significant difference between the groups (p> 0.05). To our knowledge, this is the first study investigating the role of STING expression in the chronicity of HBV. Although there was no statistically significant difference between the groups, the data that showed STING expression levels in naturally immunized individuals were approximately 10% higher than those in chronic hepatitis B patients and was considered as an important finding.

Anahtar Kelime:

Belge Türü: Makale Makale Türü: Araştırma Makalesi Erişim Türü: Bibliyografik

1. Deny P, Zoulim F. Hepatitis B virus: from diagnosis to treatment. Pathol Biol (Paris) 2010;58(4):245-53.
2. Guidotti LG, Isogawa M, Chisari FV. Host-virus interactions in hepatitis B virus infection. Curr Opin Immunol 2015;36:61-6.
3. Hui CK, Lau GK. Immune system and hepatitis B virus infection. J Clin Virol 2005;34(1):44-8.
4. Pei RJ, Chen XW, Lu MJ. Control of hepatitis B virus replication by interferons and Toll-like receptor signaling pathways. World J Gastroenterol 2014;20(33):11618-29.
5. UpToDate [Internet]. Waltham, MA: UpToDate; 2018. Hepatitis B virus: Clinical manifestations and natural history; (Alıntılanma tarihi: 28.03.2017); http://www.uptodate.com/contents/clinical-manifestations-andnatural-history-of-hepatitis-b-virus-infection.
6. Dhanwani R, Takahashi M, Sharma S. Cytosolic sensing of immuno-stimulatory DNA, the enemy within. Curr Opin Immunol 2018;50:82-7.
7. Ishikawa H, Ma Z, Barber GN. STING regulates intracellular DNA-mediated, type I interferon dependent innate immunity. Nature 2009;461(7265):788-92.
8. Barber GN. STING-dependent cytosolic DNA sensing pathways. Trends Immunol 2014;35(2):88-93.
9. Burdette DL, Vance RE. STING and the immune response to nucleic acids in the cytosol. Nat Immunol 2013;14(1):19-26.
10. Guo F, Han Y, Zhao X, Wang J, Liu F, Xu C, et al. STING agonists induce an innate antiviral immune response against hepatitis B virus. Antimicrob Agents Chemother 2015;59(2):1273-81.
11. Song S, Peng P, Tang Z, Zhao J, Wu W, Li H, et al. Decreased expression of STING predicts poor prognosis in patients with gastric cancer. Sci Rep 2017;7:39858.
12. Yeşilyurt E, Aslan SÖ, Kalkancı A, Fidan I, Oğan MC, Kuştimur S. Ertapenem ve doripenemin insan periferik kan mononükleer hücrelerinden sitokin salınımına etkisi. Türk Mikrobiyol Cem Derg 2013;43(2):50-5.
13. Rao X, Huang X, Zhou Z, Lin X. An improvement of the 2ˆ(-delta delta CT) method for quantitative realtime polymerase chain reaction data analysis. Biostat Bioinforma Biomath 2013;3(3):71-85.
14. Seng LG, Daly J, Chang KC, Kuchipudi SV. High basal expression of interferon-stimulated genes in human bronchial epithelial (BEAS-2B) cells contributes to influenza A virus resistance. PLoS One 2014;9(10):e109023.
15. Liu Y, Li J, Chen J, Li Y, Wang W, Du X, et al. Hepatitis B virus polymerase disrupts K63-linked ubiquitination of STING to block innate cytosolic DNA-Sensing pathways. J Virol 2015;89(4):2287-300.
16. Ishikawa H, Barber GN. STING is an endoplasmic reticulum adaptor that facilitates innate immune signaling. Nature 2008;455(7213):674-8.
17. Liu Y, Goulet ML, Sze A, Hadj SB, Belgnaoui SM, Lababidi RR, et al. RIG-I-mediated STING upregulation restricts Herpes Simplex Virus 1 infection. J Virol 2016;90(20):9406-19.
18. Banete A, Seaver K, Bakshi D, Gee K, Basta S. On taking the STING out of immune activation. J Leukoc Biol 2018;103(6):1189-95.
19. Guo F, Tang L, Shu S, Sehgal M, Sheraz M, Liu B, et al. Activation of stimulator of interferon genes in hepatocytes suppresses the replication of hepatitis B virus. Antimicrob Agents Chemother 2017;61(10):e00771-17.
20. Liu S, Zhao K, Su X, Lu L, Zhao H, Zhang X, et al. MITA/STING and its alternative splicing isoform MRP restrict hepatitis B virus replication. PLoS One 2017;12(1):e0169701.
21. Chang J, Guo JT. Treatment of chronic hepatitis B with pattern recognition receptor agonists: current status and potential for a cure. Antiviral Res 2015;121:152-9.
22. Wu CS, Zhao Q, Zhang J, Wang JW, Qian Y, Fan YC, et al. Methylation status of the stimulator of interferon genes promoter in patients with chronic hepatitis B. Medicine 2018;97(52):e13904.
23. Xie Q, Shen HC, Jia NN, Wang H, Lin LY, An BY, et al. Patients with chronic hepatitis B infection display deficiency of plasmacytoid dendritic cells with reduced expression of TLR9. Microbes Infect 2009;11(4):515- 23.
24. Chen Z, Cheng Y, Xu Y, Liao J, Zhang X, Hu Y, et al. Expression profiles and function of Toll-like receptors 2 and 4 in peripheral blood mononuclear cells of chronic hepatitis B patients. Clin Immunol 2008;128(3):400- 8.
25. Yi G, Brendel VP, Shu C, Li P, Palanathan S, Cheng Kao C. Single nucleotide polymorphisms of human STING can affect innate immune response to cyclic dinucleotides. PLoS One 2013;8(10):e77846.
26. Trépo C, Chan HLY, Lok A. Hepatitis B virus infection. Lancet 2014;384(9959):2053-63.
27. Montella M, D’Arena G, Crispo A, Capunzo M, Nocerino F, Grimaldi M, et al. Role of sex hormones in the development and progression of hepatitis B virus-associated hepatocellular carcinoma. Int J Endocrinol 2015;2015:854530.
28. Macek JZ, Decaens T, Marlu A, Marche H, Jouvin-Marche E, Marche PN. Sex differences in spontaneous degranulation activity of intrahepatic natural killer cells during chronic hepatitis B: Association with estradiol levels. Mediators Inflamm 2017;2017:3214917.

APA	KASAP B, Buruk K, KAKLIKKAYA N, Özkaya E, AYDIN KASAP Z, Aydın F (2020). Hepatit B Virüsüne (HBV) Karşı Doğal Bağışık,Kronik HBV Enfeksiyonu Olan ve HBV ileKarşılaşmamış Bireylerdeki “Stimulator of Interferon Genes (STING)” mRNA Düzeylerinin Karşılaştırılması. , 66 - 78. 10.5578/mb.68787
Chicago	KASAP Bünyamin,Buruk Kurtulus,KAKLIKKAYA NESE,Özkaya Esra,AYDIN KASAP ZELIHA,Aydın Faruk Hepatit B Virüsüne (HBV) Karşı Doğal Bağışık,Kronik HBV Enfeksiyonu Olan ve HBV ileKarşılaşmamış Bireylerdeki “Stimulator of Interferon Genes (STING)” mRNA Düzeylerinin Karşılaştırılması. (2020): 66 - 78. 10.5578/mb.68787
MLA	KASAP Bünyamin,Buruk Kurtulus,KAKLIKKAYA NESE,Özkaya Esra,AYDIN KASAP ZELIHA,Aydın Faruk Hepatit B Virüsüne (HBV) Karşı Doğal Bağışık,Kronik HBV Enfeksiyonu Olan ve HBV ileKarşılaşmamış Bireylerdeki “Stimulator of Interferon Genes (STING)” mRNA Düzeylerinin Karşılaştırılması. , 2020, ss.66 - 78. 10.5578/mb.68787
AMA	KASAP B,Buruk K,KAKLIKKAYA N,Özkaya E,AYDIN KASAP Z,Aydın F Hepatit B Virüsüne (HBV) Karşı Doğal Bağışık,Kronik HBV Enfeksiyonu Olan ve HBV ileKarşılaşmamış Bireylerdeki “Stimulator of Interferon Genes (STING)” mRNA Düzeylerinin Karşılaştırılması. . 2020; 66 - 78. 10.5578/mb.68787
Vancouver	KASAP B,Buruk K,KAKLIKKAYA N,Özkaya E,AYDIN KASAP Z,Aydın F Hepatit B Virüsüne (HBV) Karşı Doğal Bağışık,Kronik HBV Enfeksiyonu Olan ve HBV ileKarşılaşmamış Bireylerdeki “Stimulator of Interferon Genes (STING)” mRNA Düzeylerinin Karşılaştırılması. . 2020; 66 - 78. 10.5578/mb.68787
IEEE	KASAP B,Buruk K,KAKLIKKAYA N,Özkaya E,AYDIN KASAP Z,Aydın F "Hepatit B Virüsüne (HBV) Karşı Doğal Bağışık,Kronik HBV Enfeksiyonu Olan ve HBV ileKarşılaşmamış Bireylerdeki “Stimulator of Interferon Genes (STING)” mRNA Düzeylerinin Karşılaştırılması." , ss.66 - 78, 2020. 10.5578/mb.68787
ISNAD	KASAP, Bünyamin vd. "Hepatit B Virüsüne (HBV) Karşı Doğal Bağışık,Kronik HBV Enfeksiyonu Olan ve HBV ileKarşılaşmamış Bireylerdeki “Stimulator of Interferon Genes (STING)” mRNA Düzeylerinin Karşılaştırılması". (2020), 66-78. https://doi.org/10.5578/mb.68787

APA	KASAP B, Buruk K, KAKLIKKAYA N, Özkaya E, AYDIN KASAP Z, Aydın F (2020). Hepatit B Virüsüne (HBV) Karşı Doğal Bağışık,Kronik HBV Enfeksiyonu Olan ve HBV ileKarşılaşmamış Bireylerdeki “Stimulator of Interferon Genes (STING)” mRNA Düzeylerinin Karşılaştırılması. Mikrobiyoloji Bülteni, 54(1), 66 - 78. 10.5578/mb.68787
Chicago	KASAP Bünyamin,Buruk Kurtulus,KAKLIKKAYA NESE,Özkaya Esra,AYDIN KASAP ZELIHA,Aydın Faruk Hepatit B Virüsüne (HBV) Karşı Doğal Bağışık,Kronik HBV Enfeksiyonu Olan ve HBV ileKarşılaşmamış Bireylerdeki “Stimulator of Interferon Genes (STING)” mRNA Düzeylerinin Karşılaştırılması. Mikrobiyoloji Bülteni 54, no.1 (2020): 66 - 78. 10.5578/mb.68787
MLA	KASAP Bünyamin,Buruk Kurtulus,KAKLIKKAYA NESE,Özkaya Esra,AYDIN KASAP ZELIHA,Aydın Faruk Hepatit B Virüsüne (HBV) Karşı Doğal Bağışık,Kronik HBV Enfeksiyonu Olan ve HBV ileKarşılaşmamış Bireylerdeki “Stimulator of Interferon Genes (STING)” mRNA Düzeylerinin Karşılaştırılması. Mikrobiyoloji Bülteni, vol.54, no.1, 2020, ss.66 - 78. 10.5578/mb.68787
AMA	KASAP B,Buruk K,KAKLIKKAYA N,Özkaya E,AYDIN KASAP Z,Aydın F Hepatit B Virüsüne (HBV) Karşı Doğal Bağışık,Kronik HBV Enfeksiyonu Olan ve HBV ileKarşılaşmamış Bireylerdeki “Stimulator of Interferon Genes (STING)” mRNA Düzeylerinin Karşılaştırılması. Mikrobiyoloji Bülteni. 2020; 54(1): 66 - 78. 10.5578/mb.68787
Vancouver	KASAP B,Buruk K,KAKLIKKAYA N,Özkaya E,AYDIN KASAP Z,Aydın F Hepatit B Virüsüne (HBV) Karşı Doğal Bağışık,Kronik HBV Enfeksiyonu Olan ve HBV ileKarşılaşmamış Bireylerdeki “Stimulator of Interferon Genes (STING)” mRNA Düzeylerinin Karşılaştırılması. Mikrobiyoloji Bülteni. 2020; 54(1): 66 - 78. 10.5578/mb.68787
IEEE	KASAP B,Buruk K,KAKLIKKAYA N,Özkaya E,AYDIN KASAP Z,Aydın F "Hepatit B Virüsüne (HBV) Karşı Doğal Bağışık,Kronik HBV Enfeksiyonu Olan ve HBV ileKarşılaşmamış Bireylerdeki “Stimulator of Interferon Genes (STING)” mRNA Düzeylerinin Karşılaştırılması." Mikrobiyoloji Bülteni, 54, ss.66 - 78, 2020. 10.5578/mb.68787
ISNAD	KASAP, Bünyamin vd. "Hepatit B Virüsüne (HBV) Karşı Doğal Bağışık,Kronik HBV Enfeksiyonu Olan ve HBV ileKarşılaşmamış Bireylerdeki “Stimulator of Interferon Genes (STING)” mRNA Düzeylerinin Karşılaştırılması". Mikrobiyoloji Bülteni 54/1 (2020), 66-78. https://doi.org/10.5578/mb.68787