Yerli Bir Kala-Azar Hastasından İzole Edilen Leishmania donovani/L. infantum Hibridinin Karakterizasyonu: In vivo Modele Ait Ön Bulgular
Yıl: 2021 Cilt: 45 Sayı: 2 Sayfa Aralığı: 36 - 40 Metin Dili: Türkçe İndeks Tarihi: 20-01-2022
Yerli Bir Kala-Azar Hastasından İzole Edilen Leishmania donovani/L. infantum Hibridinin Karakterizasyonu: In vivo Modele Ait Ön Bulgular
Öz: Amaç: Bu çalışmada, Manisa’da tedavi gören bir viseral leishmaniasis hastasından izole edilen ve Leishmania’lara özgü ITS-1, hsp70 ve cpb gen bölgelerine yönelik analizlerle Leishmania donovani/L. infantum hibridi olduğu gösterilen etkenin karakterizasyonuna yönelik in vivo deneyler sunulmakta olup, ilk sonuçlar L. donovani ve L. infantum’un referans suşlarıyla karşılaştırılmaktadır. Yöntemler: Çalışma için, 25-30 gr ağırlığında dişi Balb/C fareler ile (her biri 16’şar fare içeren) üç farklı çalışma grubu (ÇG) ve 8 fareden oluşan bir kontrol grubu oluşturulmuştur. Sıvı azottaki referans L. donovani (MHOM/IN/1980/DD8), L. infantum (MHOM/TN/1980/IP1) suşlarla L. donovani/L. infantum hibridi (MHOM/TR/2014/CBVL-LI/LD) çözdürülüp kültive edilmiş ve 25 °C’de inkübe edilmiştir. Üç suşa ait 1x108 /mL promastigot, 15 (mikrolitre; µL) dozda ÇG’deki farelerin kuyruk venlerine uygulanmıştır. Fareler sakrifiye edildikten sonra çıkarılan karaciğer ve dalak dokuları immünolojik, immünohistokimyasal ve patolojik testler için saklanmıştır. Bulgular: Farelerin karaciğer ve dalak dokularında enfeksiyon varlığı, hem özgül ELISA testiyle hem de NNN besiyerinde karaciğer ve dalak dokularından Leishmania promastigotlarının üretilmesiyle gösterilmiştir. Bununla birlikte, karaciğer ve dalaklardan hazırlanan “touch biyopsi” yaymaları incelendiğinde, hiçbir grupta Leishmania amastigotlarına rastlanmamıştır. Ayrıca VL’ye bağlı doku hasarını saptamak için yapılan immünohistokimyasal boyamalarda (IL-9, CD-117, anti-MBP, CD163, CD4, CD8 ve CD31) hiçbir grupta doku hasarına yönelik bir bulgu elde edilmemiştir. Sonuç: Edinilen sonuçlar, hibrid Leishmania ve referans L. donovani ve L. infantum suşlarının ÇG’deki Balb/C farelerinin karaciğer ve dalaklarına ulaştığını, ancak patolojik bir etki oluşmadığını göstermektedir. Bununla birlikte, bu üç Leishmania izolatının, başka bir çalışma için aynı tür farelerin deri altlarına uygulandığında deride lezyon oluşturduğu belirlenmiştir. Projeye ait deneyler tamamlanıp sonuçların elde edilmesinin ardından bu çalışmada sunulan bulgular yeniden değerlendirilecektir.
Anahtar Kelime: Characterisation of the Leishmania donovani/L. infantum Hybrid Isolated from an Autochothonous Kala-Azar Patient: Preliminary Results of an In Vivo Model
Öz: Objective: In the present study, preliminary outcomes of the in vivo assessment of a Leishmania donovani/L. infantum hybrid isolated from a hospitalised patient with visceral leishmaniasis in Manisa and identified through analysis of the Leishmania-specific ITS-1, hsp70 and cpb gene regions are presented in comparison with reference strains of L. donovani and L. infantum. Methods: Three different study groups [(SG); n=16 mice each] and a control group (n=8 mice) were established with female Balb/C mice weighing 25-30 g. Reference L. donovani (MHOM/IN/1980/DD8), reference L. infantum (MHOM/TN/1980/IP1) and a L. donovani/L. infantum hybrid (MHOM/TR/2014/CBVLLI/LD), stored in liquid nitrogen, were thawed, cultured and incubated at 25 °C. A 15-µL dose of 1x108 /mL promastigotes of three strains was applied to the tail veins of mice in the SG. After the mice were sacrificed, the liver and spleen tissues were removed and stored for immunological, immunohistochemical and pathological analyses. Results: The presence of infection in the liver and spleen tissues of mice was detected both by a specific enzyme-linked immunosorbent assay test and from the recovery of Leishmania promastigotes from liver and spleen tissues in NNN medium. However, Leishmania amastigotes were not observed in the touch biopsy smears of livers or spleens in either of the SGs. In addition, no evidence of tissue damage was identified in the SGs after immunohistochemical staining (with antibodies against IL-9, CD-117, MBP, CD163, CD4, CD8 and CD31). Conclusion: The obtained results show that hybrid Leishmania and reference L. donovani and L. infantum strains reached the liver and spleens of Balb/C mice in SGs but were of no pathological consequence. Yet, these three Leishmania isolates caused skin lesions when applied subcutaneously in Balb/C mice in another study. The findings presented in this study will be reassessed upon completion of the project, once the final results are obtained.
Anahtar Kelime: Belge Türü: Makale Makale Türü: Araştırma Makalesi Erişim Türü: Erişime Açık
- 1. Özbel Y, Özensoy Töz S. Tıbbi Parazit Hastalıkları: Leishmaniosis, 2007. İzmir: Meta Basım Matbaacılık Hizmetleri.
- 2. Ok UZ, Balcioğlu IC, Taylan Ozkan A, Ozensoy S, Ozbel Y. Leishmaniasis in Turkey. Acta Trop 2002; 84: 43-8.
- 3. Burza S, Croft SL, Boelaert M. Leishmaniasis. Lancet 2018; 392: 951-70.
- 4. Loeuillet C, Bañuls AL, Hide M. Study of Leishmania pathogenesis in mice: experimental considerations. Parasit Vectors 2016; 9: 144.
- 5. Özbilgin A, Harman M, Karakuş M, Bart A, Töz S, Kurt Ö, et al. Leishmaniasis in Turkey: Visceral and cutaneous leishmaniasis caused by Leishmania donovani in Turkey. Acta Trop 2017; 173: 90-6.
- 6. Miles MA, Yeo M, Mauricio IL. Genetics. Leishmania exploit sex. Science 2009; 324: 187-9.
- 7. Conceição-Silva F, Morgado FN. Leishmania Spp-Host Interaction: There Is Always an Onset, but Is There an End? Front Cell Infect Microbiol 2019; 9: 330.
- 8. Loría-Cervera EN, Andrade-Narváez FJ. Animal models for the study of leishmaniasis immunology. Rev Inst Med Trop Sao Paulo 2014; 56: 1-11. 9. Volf P, Sadlova J. Sex in Leishmania. Science 2009; 324: 1644.
- 10. Ravel C, Cortes S, Pratlong F, Morio F, Dedet JP, Campino L. First report of genetic hybrids between two very divergent Leishmania species: Leishmania infantum and Leishmania major. Int J Parasitol 2006; 36: 1383-8.
- 11. Nolder D, Roncal N, Davies CR, Llanos-Cuentas A, Miles MA. Multiple hybrid genotypes of Leishmania (viannia) in a focus of mucocutaneous Leishmaniasis. Am J Trop Med Hyg 2007; 76: 573-8.
- 12. Garin YJ, Sulahian A, Pratlong F, Meneceur P, Gangneux JP, Prina E, et al. Virulence of Leishmania infantum is expressed as a clonal and dominant phenotype in experimental infections. Infect Immun 2001; 69: 7365-73.
- 13. Eroglu F, Koltas IS, Alabaz D, Uzun S, Karakas M. Clinical manifestations and genetic variation of Leishmania infantum and Leishmania tropica in Southern Turkey. Exp Parasitol 2015; 154: 67-74.
- 14. Nieto A, Domínguez-Bernal G, Orden JA, De La Fuente R, Madrid-Elena N, Carrión J. Mechanisms of resistance and susceptibility to experimental visceral leishmaniosis: BALB/c mouse versus Syrian hamster model. Vet Res 2011; 42: 39.
- 15. Carrión J, Nieto A, Iborra S, Iniesta V, Soto M, Folgueira C, et al. Immunohistological features of visceral leishmaniasis in BALB/c mice. Parasite Immunol 2006; 28: 173-83.
- 16. Yurdakul P, Dalton J, Beattie L, Brown N, Erguven S, Maroof A, et al. Compartment-specific remodeling of splenic micro-architecture during experimental visceral leishmaniasis. Am J Pathol 2011; 179: 23-9.
- 17. Wilson ME, Jeronimo SM, Pearson RD. Immunopathogenesis of infection with the visceralizing Leishmania species. Microb Pathog 2005; 38: 147- 60.
- 18. Loría-Cervera EN, Sosa-Bibiano EI, Van Wynsberghe NR, AndradeNarváez FJ. Finding a model for the study of Leishmania (Leishmania) mexicana infection: The Yucatan Deer mouse (Peromyscus yucatanicus) as a suitable option. Acta Trop 2018; 187: 158-64.
- 19. Rodrigues V, Cordeiro-da-Silva A, Laforge M, Silvestre R, Estaquier J. Regulation of immunity during visceral Leishmania infection. Parasit Vectors 2016; 9: 118.
- 20. Moreira JP, Malta Fde M, Diniz MA, Kikuchi L, Chagas AL, Lima Lde S, et al. Interferon lambda and hepatitis C virus core protein polymorphisms associated with liver cancer. Virology 2016; 493: 136-41.
- 21. Çavuş İ, Ocak F, Kaya T, Özbilgin A. Cryopreservation of Leishmania Species in Manisa Province. Turkiye Parazitol Derg 2017; 41: 152-5.
- 22. Kaye PM, Svensson M, Ato M, Maroof A, Polley R, Stager S, et al. The immunopathology of experimental visceral leishmaniasis. Immunol Rev 2004; 201: 239-53.
- 23. Gupta S; Nishi. Visceral leishmaniasis: experimental models for drug discovery. Indian J Med Res 2011, 133: 27-39.
- 24. Hide M, Marion E, Pomares C, Fisa R, Marty P, Bañuls AL. Parasitic genotypes appear to differ in leishmaniasis patients compared with asymptomatic related carriers. Int J Parasitol 2013; 43: 389-97.
- 25. Murray HW, Stern JJ, Welte K, Rubin BY, Carriero SM, Nathan CF. Experimental visceral leishmaniasis: production of interleukin 2 and interferon-gamma, tissue immune reaction, and response to treatment with interleukin 2 and interferon-gamma. J Immunol 1987; 138: 2290-7.
- 26. Engwerda CR, Ato M, Kaye PM. Macrophages, pathology and parasite persistence in experimental visceral leishmaniasis. Trends Parasitol 2004; 20: 524-30.
APA | Kurt Ö, Mansur-Ozen N, Aydın E, Kaya D, KAYHAN C, oktem okullu s, ince u, yildiz zeyrek f (2021). Yerli Bir Kala-Azar Hastasından İzole Edilen Leishmania donovani/L. infantum Hibridinin Karakterizasyonu: In vivo Modele Ait Ön Bulgular. , 36 - 40. |
Chicago | Kurt Özgür,Mansur-Ozen Nesteren,Aydın Elif Merve,Kaya Deniz Ece,KAYHAN CAVİT KEREM,oktem okullu sinem,ince umit,yildiz zeyrek fadile Yerli Bir Kala-Azar Hastasından İzole Edilen Leishmania donovani/L. infantum Hibridinin Karakterizasyonu: In vivo Modele Ait Ön Bulgular. (2021): 36 - 40. |
MLA | Kurt Özgür,Mansur-Ozen Nesteren,Aydın Elif Merve,Kaya Deniz Ece,KAYHAN CAVİT KEREM,oktem okullu sinem,ince umit,yildiz zeyrek fadile Yerli Bir Kala-Azar Hastasından İzole Edilen Leishmania donovani/L. infantum Hibridinin Karakterizasyonu: In vivo Modele Ait Ön Bulgular. , 2021, ss.36 - 40. |
AMA | Kurt Ö,Mansur-Ozen N,Aydın E,Kaya D,KAYHAN C,oktem okullu s,ince u,yildiz zeyrek f Yerli Bir Kala-Azar Hastasından İzole Edilen Leishmania donovani/L. infantum Hibridinin Karakterizasyonu: In vivo Modele Ait Ön Bulgular. . 2021; 36 - 40. |
Vancouver | Kurt Ö,Mansur-Ozen N,Aydın E,Kaya D,KAYHAN C,oktem okullu s,ince u,yildiz zeyrek f Yerli Bir Kala-Azar Hastasından İzole Edilen Leishmania donovani/L. infantum Hibridinin Karakterizasyonu: In vivo Modele Ait Ön Bulgular. . 2021; 36 - 40. |
IEEE | Kurt Ö,Mansur-Ozen N,Aydın E,Kaya D,KAYHAN C,oktem okullu s,ince u,yildiz zeyrek f "Yerli Bir Kala-Azar Hastasından İzole Edilen Leishmania donovani/L. infantum Hibridinin Karakterizasyonu: In vivo Modele Ait Ön Bulgular." , ss.36 - 40, 2021. |
ISNAD | Kurt, Özgür vd. "Yerli Bir Kala-Azar Hastasından İzole Edilen Leishmania donovani/L. infantum Hibridinin Karakterizasyonu: In vivo Modele Ait Ön Bulgular". (2021), 36-40. |
APA | Kurt Ö, Mansur-Ozen N, Aydın E, Kaya D, KAYHAN C, oktem okullu s, ince u, yildiz zeyrek f (2021). Yerli Bir Kala-Azar Hastasından İzole Edilen Leishmania donovani/L. infantum Hibridinin Karakterizasyonu: In vivo Modele Ait Ön Bulgular. Türkiye Parazitoloji Dergisi, 45(2), 36 - 40. |
Chicago | Kurt Özgür,Mansur-Ozen Nesteren,Aydın Elif Merve,Kaya Deniz Ece,KAYHAN CAVİT KEREM,oktem okullu sinem,ince umit,yildiz zeyrek fadile Yerli Bir Kala-Azar Hastasından İzole Edilen Leishmania donovani/L. infantum Hibridinin Karakterizasyonu: In vivo Modele Ait Ön Bulgular. Türkiye Parazitoloji Dergisi 45, no.2 (2021): 36 - 40. |
MLA | Kurt Özgür,Mansur-Ozen Nesteren,Aydın Elif Merve,Kaya Deniz Ece,KAYHAN CAVİT KEREM,oktem okullu sinem,ince umit,yildiz zeyrek fadile Yerli Bir Kala-Azar Hastasından İzole Edilen Leishmania donovani/L. infantum Hibridinin Karakterizasyonu: In vivo Modele Ait Ön Bulgular. Türkiye Parazitoloji Dergisi, vol.45, no.2, 2021, ss.36 - 40. |
AMA | Kurt Ö,Mansur-Ozen N,Aydın E,Kaya D,KAYHAN C,oktem okullu s,ince u,yildiz zeyrek f Yerli Bir Kala-Azar Hastasından İzole Edilen Leishmania donovani/L. infantum Hibridinin Karakterizasyonu: In vivo Modele Ait Ön Bulgular. Türkiye Parazitoloji Dergisi. 2021; 45(2): 36 - 40. |
Vancouver | Kurt Ö,Mansur-Ozen N,Aydın E,Kaya D,KAYHAN C,oktem okullu s,ince u,yildiz zeyrek f Yerli Bir Kala-Azar Hastasından İzole Edilen Leishmania donovani/L. infantum Hibridinin Karakterizasyonu: In vivo Modele Ait Ön Bulgular. Türkiye Parazitoloji Dergisi. 2021; 45(2): 36 - 40. |
IEEE | Kurt Ö,Mansur-Ozen N,Aydın E,Kaya D,KAYHAN C,oktem okullu s,ince u,yildiz zeyrek f "Yerli Bir Kala-Azar Hastasından İzole Edilen Leishmania donovani/L. infantum Hibridinin Karakterizasyonu: In vivo Modele Ait Ön Bulgular." Türkiye Parazitoloji Dergisi, 45, ss.36 - 40, 2021. |
ISNAD | Kurt, Özgür vd. "Yerli Bir Kala-Azar Hastasından İzole Edilen Leishmania donovani/L. infantum Hibridinin Karakterizasyonu: In vivo Modele Ait Ön Bulgular". Türkiye Parazitoloji Dergisi 45/2 (2021), 36-40. |