Koyun Orijinli Polimorf Nükleer Lökositlerde Toxoplasma gondii’ye Karşı Şekillenen Hücre Dışı Tuzağın Kantitatif Analizinde Picogreen ve Sytox Orange Boyalarının Karşılaştırılması

YILDIZ, Kader; ATAN, Perçem

doi:10.5152/tpd.2018.5952

Koyun Orijinli Polimorf Nükleer Lökositlerde Toxoplasma gondii’ye Karşı Şekillenen Hücre Dışı Tuzağın Kantitatif Analizinde Picogreen ve Sytox Orange Boyalarının Karşılaştırılması

Perçem ATAN, (Sinop İl Sağlık Müdürlüğü, Erfelek İlçe Devlet Hastanesi, Sinop, Türkiye)

Kader YILDIZ (Kırıkkale Üniversitesi, Veteriner Fakültesi, Parazitoloji Anabilim Dalı, Kırıkkale, Türkiye)

Türkiye Parazitoloji Dergisi

0 0

Yıl: 2018 Cilt: 42 Sayı: 4 Sayfa Aralığı: 240 - 244 Metin Dili: Türkçe DOI: 10.5152/tpd.2018.5952 İndeks Tarihi: 14-10-2019

Koyun Orijinli Polimorf Nükleer Lökositlerde Toxoplasma gondii’ye Karşı Şekillenen Hücre Dışı Tuzağın Kantitatif Analizinde Picogreen ve Sytox Orange Boyalarının Karşılaştırılması

Öz:

Amaç: Bu çalışmada in vitro şekillenen hücre dışı tuzak yapılarının omurgasını oluşturan DNA’nın kantitatif ölçümünde iki ekstrasellüler DNA boyasının(Sytox orange ve Picogreen) etkinliğinin karşılaştırılması amaçlanmıştır. Bu amaçla koyun polimorf nükleer lökosit (PMN)-Toxoplasma gondii takizoitkültürü model olarak alınmıştır.Yöntemler: Çalışma kapsamında koyunlardan izole edilen PMN ve T. gondii takizoitleri farklı sürelerde (30, 60, 90 ve 120 dakika) inkübe edilmiş vereaksiyon sonucunda açığa çıkan ekstrasellüler DNA iki farklı boya ile boyanarak ölçülmüştür.Bulgular: Çalışma sonucunda 30 dakikalık inkubasyon dışındaki (p=0,014) inkubasyon sürelerinde açığa çıkan DNA’nın ölçümü bakımından iki boyaarasında istatistiksel fark bulunmamıştır (p>0,05).Sonuç: İki boya arasında 30. dakikadaki boyanma farklılığı önemli bulunmuştur. Bu durumun sebebinin kullanılan boyaya ait boyama özelliği ile ilgiliolabileceği düşünülmüştür. In vitro netosis çalışan araştırıcıların kısa süreli inkubasyon sonucunda şekillenen ekstrasellüler DNA’nın kantitatif analizindeiki farklı boya kullanmaları önerilmiştir.

Anahtar Kelime:

Konular: Biyoloji Veterinerlik

Comparison of Picogreen and Sytox Orange Stains in Quantitative Analysis of Extracellular Trap Formed against Toxoplasma gondii in Polymorphonuclear Leukocytes from Sheep

Öz:

Objective: The present study aimed to compare the effectiveness of two extracellular DNA dyes (Sytox Orange and PicoGreen) in quantitative measurement of the DNA that forms the backbone of the extracellular trap structures in vitro. Toward this aim, the co-culture of polymorphonuclear leucocytes (PMNs) and Toxoplasma gondii tachyzoites isolated from sheep was selected as model. Methods: T. gondii tachyzoites and PMNs isolated from the sheep were incubated for varied durations (30, 60, 90 and 120 min); the extracellular DNA released following this incubation was stained using two different dyes. Results: In the present study, no statistical significant difference was observed between the two extracellular DNA dyes with regard to the measurement of extracellular DNA released for all the incubation durations (p>0.05), except for the 30-min incubation (p=0.014). Conclusion: There was a statistically significant difference at 30 min incubation time. This difference may be attributed to the staining properties of the dye. Researchers studying in vitro netosis are recommended to use two different extracellular DNA dyes for the quantitative analysis of extracellular DNA formed during short-term incubation.

Anahtar Kelime:

Konular: Biyoloji Veterinerlik

Belge Türü: Makale Makale Türü: Araştırma Makalesi Erişim Türü: Erişime Açık

1. Dubey JP. Toxoplasmosis in Animals and Humans, 2nd Ed, CRC Press, Boca Raton, FL; 2010. p: 1-313.
2. Sibley LD, Khan A, Ajioka JW, Rosenthal BM. Genetic diversity of Toxoplasma gondii in animals and humans. Philos Trans R Soc Lond B Biol Sci 2009; 364: 2749-61. [CrossRef]
3. Abbas AK, Lichtman AH, Pillai S. Basic Immunology Functions and Disorders of the Immune System. Temel Immünoloji İmmün Sistemin İşlevleri ve Bozuklukları. 4th ed. Çeviren: Camcıoğlu Y, Deniz G, Güneş Tıp Kitapevleri Ankara; 2016. s:17-40.
4. Eales JC. Immunology for Life Scientists, 2nd. ed. John Wiley & Sons, Inc, USA; 2005. p:75.
5. Simon EJ, Dickey JL, Hogan KA, Reece JB. Campbell Essential Biology with Physiology. Campbell Temel Biyoloji Fizyoloji İlaveli. 5th ed. Çeviren: Gündüz E, Türkan İ, Palme Yayıncılık Ankara; 2016.
6. Nathan C. Neutrophils and immunity: challenges and opportunities. Nat Rev Immunol 2006; 6: 173-82. [CrossRef]
7. Appelberg R. Neutrophils and intracellular pathogens: beyond phagocytosis and killing. Trends Microbiol 2007; 15: 87-92. [CrossRef]
8. Akira S, Uematsu S, Takeuchı O. Pathogen recognition and innate immunity. Cell 2006; 124: 783-801. [CrossRef]
9. Phillipson M, Kubes P. The neutrophil in vascular inflammation. Nat Med 2011; 17: 1381-90. [CrossRef]
10. Brinkmann V, Reichard U, Goosmann C, Fauler B, Uhlemann Y, Weiss D.S, Weinrauch Y, Zychlinsky A. Neutrophil extracellular traps kill bacteria. Science 2004; 303: 1532-35. [CrossRef]
11. Kaplan MJ, Radic M. Neutrophil extracellular traps: double-edge dswordsof innate immunity. J Immunol 2012; 189: 2689-95. [CrossRef]
12. Brinkmann V, Zychlinsky A. Neutrophil extracellular traps: Is immunity the second function of chromatin. J Cell Biol 2012; 198: 773-83. [CrossRef]
13. Goldmann O, Medina E. The expanding world of extracellular traps: not only neutrophils but much more. Front Immunol 2012; 3: 420.
14. Je S, Quan H, Yoon Y, Na Yirang, Kim BJ, Seok SH. Mycobacterium massiliense induces macrophage extracellular traps with facilitating bacterial growth. PLoS One 2016; 11: e0155685. [CrossRef]
15. Yıldız K. Netosis: Nötrofilin patojenle savaşta kullandığı alternatif savunma yöntemi. Türkiye Parazitol Derg 2016; 40: 158-62. [CrossRef]
16. Brinkmann V, Zychlinsky A. Beneficial suicide: why neutrophils die to make NETs. Nat Rev Microbiol 2007; 5: 577-82. [CrossRef]
17. Fuchs TA, Abed U, Goosmann C, Hurwıtz R, Schulze I, Wahn V et al. Novel cell death program leads to neutrophil extracellular traps. J Cell Biol 2007; 176: 231-41. [CrossRef]
18. Puralı N. Fonksiyonel hücre görüntüleme teknikleri. Hacettepe Tıp Dergisi 2004; 35: 107-13.
19. Baker VS, Imade GE, Molta NB. Cytokine-associated neutrophil extracellular traps and antinuclear antibodies in Plasmodium falciparum infected children under six years of age. Malar J 2008; 7: 41. [CrossRef]
20. Guimarães-Costa AB1, Nascimento MT, Froment GS, Soares RP, Morgado FN, Conceição-Silva F, et al. Leishmania amazonensis promastigotes induce and are killed by neutrophil extracellular traps. Send to Proc Natl Acad Sci USA 2009; 106: 6748-53. [CrossRef]
21. Behrendt JH, Ruiz A, Zahner H, Taubert, A, Hermosilla C. Neutrophil extracellular trap formation as innate immune reactions against the apicomplexan parasite Eimeria bovis. Vet Immun Immunopathol 2010; 133: 1-8. [CrossRef]
22. Gabriel C, McMaster WR, Girard D, Descoteaux A. Leishmania donovani promastigotes evade the antimicrobial activity of neutrophil extracellular traps. J Immunol 2010; 185: 4319-27. [CrossRef]
23. Abi Abdallah DS, Lin C, Ball CJ, King MR, Duhamel GE, Denkers EY. Toxoplasma gondii triggers release of human and mouse neutrophil extracellular traps. Infect Immun 2012; 80: 768-77. [CrossRef]
24. Munoz Caro T, Hermosilla C, Silva LMR, Cortes H, Taubert A. Neutrophil extracellular traps as innate immune reaction against the emerging apicomplexan parasite Besnoitia besnoiti. PloS One 2014; 9: e91415. [CrossRef]
25. Munoz Caro T, Silva LM, Ritter C, Taubert A, Hermosilla C. Besnoitia besnoiti tachyzoites induce monocyte extracellular trap formation. Parasitol Res 2014; 113: 4189-97. [CrossRef]
26. Silva LMR, Munoz Caro T, Gerstberger R, Vila-Vicosa MJM, Cortes HC, Hermosilla C, et al. The apicomplexan parasite Eimeria arloingi induces caprine neutrophil extracellular traps. Parasitol Res 2014; 113: 2797-807. [CrossRef]
27. Morgado FN, Nascimento MT, Saraiva EM, de Oliveira-Ribeiro C, Madeira Mde F, da Costa-Santos M, et al. Are neutrophil extracellular traps playing a role in the parasite control in active American tegumentary leishmaniasis lesions. PLoS One 2015; 10: e0133063. [CrossRef]
28. Reichel M, Munoz Caro T, Sanchez Contreras G. Harbour seal (Phoca vitulina) PMN and monocytes release extracellular traps to capture the apicomplexan parasite Toxoplasma gondii. Dev Comp Immunol 2015; 50: 106-15. [CrossRef]
29. Munoz Caro T, Lendner M, Daugschies A, Hermosilla C, Taubert A. NADPH oxidase, MPO, NE, ERK1/2, p38 MAPK and Ca2+ influx are essential for Cryptosporidium parvum induced NET formation. Dev Comp Immunol 2015; 52: 245-54. [CrossRef]
30. Wei Z, Hermosilla C, Taubert A, He X, Wang X, Gong P, et al. Canine neutrophil extracellular traps release induced by the apicomplexan parasite Neospora caninum in vitro. Front Immunol 2016; 7: 436. [CrossRef]
31. Avila EE, Salaiza N, Pulido J, Rodriguez MC, Diaz-Godinez C, Laclette JP et al. Entamoeba histolytica trophozoites and lipopeptidophosphoglycan trigger human neutrophil extracellular traps. PLoS One 2016; 11: e0158979. [CrossRef]
32. Yildiz K, Gokpinar S, Gazyağci AN, Babur C, Sursal N, Azkur AK. Role of NETs in the difference in host susceptibility to Toxoplasma gondii between sheep and cattle. Vet Immunol Immunopathol 2017; 189: 1-10. [CrossRef]

APA	ATAN P, YILDIZ K (2018). Koyun Orijinli Polimorf Nükleer Lökositlerde Toxoplasma gondii’ye Karşı Şekillenen Hücre Dışı Tuzağın Kantitatif Analizinde Picogreen ve Sytox Orange Boyalarının Karşılaştırılması. , 240 - 244. 10.5152/tpd.2018.5952
Chicago	ATAN Perçem,YILDIZ Kader Koyun Orijinli Polimorf Nükleer Lökositlerde Toxoplasma gondii’ye Karşı Şekillenen Hücre Dışı Tuzağın Kantitatif Analizinde Picogreen ve Sytox Orange Boyalarının Karşılaştırılması. (2018): 240 - 244. 10.5152/tpd.2018.5952
MLA	ATAN Perçem,YILDIZ Kader Koyun Orijinli Polimorf Nükleer Lökositlerde Toxoplasma gondii’ye Karşı Şekillenen Hücre Dışı Tuzağın Kantitatif Analizinde Picogreen ve Sytox Orange Boyalarının Karşılaştırılması. , 2018, ss.240 - 244. 10.5152/tpd.2018.5952
AMA	ATAN P,YILDIZ K Koyun Orijinli Polimorf Nükleer Lökositlerde Toxoplasma gondii’ye Karşı Şekillenen Hücre Dışı Tuzağın Kantitatif Analizinde Picogreen ve Sytox Orange Boyalarının Karşılaştırılması. . 2018; 240 - 244. 10.5152/tpd.2018.5952
Vancouver	ATAN P,YILDIZ K Koyun Orijinli Polimorf Nükleer Lökositlerde Toxoplasma gondii’ye Karşı Şekillenen Hücre Dışı Tuzağın Kantitatif Analizinde Picogreen ve Sytox Orange Boyalarının Karşılaştırılması. . 2018; 240 - 244. 10.5152/tpd.2018.5952
IEEE	ATAN P,YILDIZ K "Koyun Orijinli Polimorf Nükleer Lökositlerde Toxoplasma gondii’ye Karşı Şekillenen Hücre Dışı Tuzağın Kantitatif Analizinde Picogreen ve Sytox Orange Boyalarının Karşılaştırılması." , ss.240 - 244, 2018. 10.5152/tpd.2018.5952
ISNAD	ATAN, Perçem - YILDIZ, Kader. "Koyun Orijinli Polimorf Nükleer Lökositlerde Toxoplasma gondii’ye Karşı Şekillenen Hücre Dışı Tuzağın Kantitatif Analizinde Picogreen ve Sytox Orange Boyalarının Karşılaştırılması". (2018), 240-244. https://doi.org/10.5152/tpd.2018.5952

APA	ATAN P, YILDIZ K (2018). Koyun Orijinli Polimorf Nükleer Lökositlerde Toxoplasma gondii’ye Karşı Şekillenen Hücre Dışı Tuzağın Kantitatif Analizinde Picogreen ve Sytox Orange Boyalarının Karşılaştırılması. Türkiye Parazitoloji Dergisi, 42(4), 240 - 244. 10.5152/tpd.2018.5952
Chicago	ATAN Perçem,YILDIZ Kader Koyun Orijinli Polimorf Nükleer Lökositlerde Toxoplasma gondii’ye Karşı Şekillenen Hücre Dışı Tuzağın Kantitatif Analizinde Picogreen ve Sytox Orange Boyalarının Karşılaştırılması. Türkiye Parazitoloji Dergisi 42, no.4 (2018): 240 - 244. 10.5152/tpd.2018.5952
MLA	ATAN Perçem,YILDIZ Kader Koyun Orijinli Polimorf Nükleer Lökositlerde Toxoplasma gondii’ye Karşı Şekillenen Hücre Dışı Tuzağın Kantitatif Analizinde Picogreen ve Sytox Orange Boyalarının Karşılaştırılması. Türkiye Parazitoloji Dergisi, vol.42, no.4, 2018, ss.240 - 244. 10.5152/tpd.2018.5952
AMA	ATAN P,YILDIZ K Koyun Orijinli Polimorf Nükleer Lökositlerde Toxoplasma gondii’ye Karşı Şekillenen Hücre Dışı Tuzağın Kantitatif Analizinde Picogreen ve Sytox Orange Boyalarının Karşılaştırılması. Türkiye Parazitoloji Dergisi. 2018; 42(4): 240 - 244. 10.5152/tpd.2018.5952
Vancouver	ATAN P,YILDIZ K Koyun Orijinli Polimorf Nükleer Lökositlerde Toxoplasma gondii’ye Karşı Şekillenen Hücre Dışı Tuzağın Kantitatif Analizinde Picogreen ve Sytox Orange Boyalarının Karşılaştırılması. Türkiye Parazitoloji Dergisi. 2018; 42(4): 240 - 244. 10.5152/tpd.2018.5952
IEEE	ATAN P,YILDIZ K "Koyun Orijinli Polimorf Nükleer Lökositlerde Toxoplasma gondii’ye Karşı Şekillenen Hücre Dışı Tuzağın Kantitatif Analizinde Picogreen ve Sytox Orange Boyalarının Karşılaştırılması." Türkiye Parazitoloji Dergisi, 42, ss.240 - 244, 2018. 10.5152/tpd.2018.5952
ISNAD	ATAN, Perçem - YILDIZ, Kader. "Koyun Orijinli Polimorf Nükleer Lökositlerde Toxoplasma gondii’ye Karşı Şekillenen Hücre Dışı Tuzağın Kantitatif Analizinde Picogreen ve Sytox Orange Boyalarının Karşılaştırılması". Türkiye Parazitoloji Dergisi 42/4 (2018), 240-244. https://doi.org/10.5152/tpd.2018.5952