Ayşe Meral YÜCEL
(Orta Doğu Teknik Üniversitesi, Kimya Mühendisliği Bölümü, Ankara, Türkiye)
Proje Grubu: TÜBİTAK KBAG ProjeSayfa Sayısı: 89Proje No: 114Z487Proje Bitiş Tarihi: 15.08.2018Türkçe

0 0
Mikroalgal Tabanlı Rekombinant Protein Ekspresyon Platformunun Geliştirilmesi
Proje kapsamında mikroalgal sistemler için etkin bir rekombinant protein ekspresyon platformunun gelistirilmesi arastırılmıstır. Yürütülen çalısmalar asagıda özetlenmektedir. Mikroalglrein kontrollü kosullarda heterofilik üretimi için maliyet etkin kültür yönteminin gelistirilmesi: Bu amaçla farklı kosullarda ve farklı karbon kaynakları kullanılarak algleri büyüme performansları degerlendirilerek alglerin verimli büyüdükleri sartlar belirlenmistir. TAP büyüme ortamının en yksek verimi sagladıgı belirlenmistir. Mikroalgal sistemlerde genetik modifikasyon için gerekli olan ekspresyon vektörlerinin olusturulması: Bu amaçla projede üretimi hedeflenen streptavidin geni ve GFP geni alg transformasyonunda kullanılabilecek plasmid yapısındaki vektörlere aktarılmıstır. Elde edilen vektörler moleküler biyolojik yöntemler ile dogrulanmıstır. Mikroalgal sistemlerde etkin ve stabil ekspresyon kosullarının arastırılması: GFP içerikli vektörler kullanılarak alg hücrelerinde elektroporasyon temelli bir transformasyon yöntemi optimize edilmistir. Bu yöntem kullanılarak streptavidin geni içeren vektör alg hücrelerine transforme edilmis, stabil transformasyon antibiyotikli besi yeri üzerinde jenerasyonlar boyunca büyütülen hücrelerde, muhtelif moleküler biyolojik yöntemler kullanılarak dogrulanmıstır. Strepativin genini kromozomal olarak içeren alg hücreleri elde edilmistir. Strepatvidin proteininin algal sistemlerde üretimi: Gerekli transformasyon ekspresyon ve protein purifikasyon protokellerinin tamamı çalısılmıs ve ilgili prototkoller gelistitilmistir. Strepatvidin geninin hücrelere aktarılmıs ve ifadesinin ilk basamagı olan mRNA trnaskripsiyonunun dogrulanmıs olmasına karsın, protein izolasyonu sonucunda streptavidin proteininin elde edildigine dair net bir sonuca ulasılamamıstır. Ilerleyen dönemlerde kromozomal transformasyon yerine kloroplast transformasyonunun bu sorunu asabilecegi düsünülmektedir. Streptavidin poteinlerinin etkinliginin DNA çipleri ve yatay akıslı tanı platformlarında belirlenmesi: Streptavidinin etkinliginin belirlenmesi amacıyla DNA çipleri ve yatay akıslı test striplerinin ticari olarak temin edilen streptavidin ve projede elde edilen streptavidin ile hazırlanmıs ve karsılastırılmıstır. Alg hücrelerinden elde edilen streptavid ile istenen sonuçlara ulasılamamasına ragmen ticari olarak temin edilen streptavidin ile hazırlanan DNA çipleri ve test stripleri pozitif sonuçlar vermistir. Sonuç olarak proje öngörüsünde temel hedefimiz olan alg hücrelerinde rekombinant üretimi için gerekli olan tüm asamalara yönelik bilgi birikimi olusturularak ilgili yöntemlerin tümü optimize edilerek hayata geçirilmistir.

TÜBİTAK ULAKBİM Ulusal Akademik Ağ ve Bilgi Merkezi Cahit Arf Bilgi Merkezi © 2019 Tüm Hakları Saklıdır.