Serin alkali proteaz üretiminde hücreiçi darboğazların belirlenmesi ve prosesin geliştirilmesi
Proje Grubu: MİSAG Sayfa Sayısı: 62 Proje No: MİSAG-176 Proje Bitiş Tarihi: 01.03.2003 Metin Dili: Türkçe İndeks Tarihi: 29-07-2022
Serin alkali proteaz üretiminde hücreiçi darboğazların belirlenmesi ve prosesin geliştirilmesi
Öz: Mikrobiyal serin proteazlar içinde serin alkali proteazlar farmasötik sanayinde, gıda endüstrisinde (et, içecek, süt vd.), deri sanayinde, fotoğraf endüstrisinde (filmden gümüşün geri kazanımı), deterjan katkı maddesi olarak büyük öneme sahiptir. Beş alt-programdan oluşan projenin birinci evresinde SAP üretim potansiyelinin, verim ve seçimliliğin artırılması için üç alt programdan oluşan genetik mühendisliği (GM) araştırma programı ile B.licheniformis'de SAP üretiminden sorumlu gen subC önce pRS316 E.coli-yeast shuttle plasrnide klonlanmış sonra da pHV1431 E.coli-Bacillus shuttle plasmide sub-klonlama yapılmış ve rekombinant DNA swöC+pHV1431 dokuz Bacillus türü hücreye aktarılarak rekombinant mikroorganizmalar elde edilmiştir. Mikroorganizmaların performansı tanımlanmış ortamda kıyaslanmış ve SAP üretimi için en uygun mikroorganizmanın B.licheniformis pHV1431::subC olduğu bulunmuştur. İkinci alt-programda Metabolik yolizi mühendisliği (MYM) analizi ile hücreiçi tepkimeler stokiyometrik denklemleriyle birlikte araştırılarak 147 tepkimeden oluşan tepkime yolizleri belirlenmiş, 147 tepkimede yer alan 105 bileşik için kütle korunum denklemlerinden oluşan matematik model kurulmuş, ve rekombinant hücrelerin hücreiçi tepkime hızlanndaki değişimler incelenmiş ve üretim hızı açısından da en uygun konak hücrenin recombinant B.licheniformis olduğu bulunmuştur. Üçüncü alt-programda hücreiçi metabolit derişimlerinin belirlenmesi için yöntem geliştirilmiş ve hücreiçi valin derişiminin SAP üretimini kısıtladığı bulunmuş; dördüncü alt-programda alanin grubu amino asitlerin SAP üretimine etkisi araştırılmıştır. Son alt-programda kompleks ortamda (melas temelli) rekombinant mikroorganizmaların üretim potansiyelleri kıyaslanmış; kompleks ortamda SAP üretimi için en uygun konak hücre B.subtilis pHV143l::subC olarak bulunmuş ve melas içeren ortamda oksijen aktarımının etkisi incelenmiştir. S.on aşamada soya temelli ortam tasannu yapılarak SAP üretim prosesi geliştirilmiştir.
Anahtar Kelime: Konular:
Serin alkali proteaz üretiminde hücreiçi darboğazların belirlenmesi ve prosesin geliştirilmesi
Öz: The proteolytic enzymes are by far the most important groups of enzymes produced commercially. Due to the alkaline nature, serine alkaline proteases (SAP) are used in pharmaceutical, protein brewing, meat, dairy, photographic, leather, and detergent industries. In the first phase, for developing recombinant Bacillus strains, subC gene encoding SAP was amplified from the chromosal DNA of the wild type B.licheniformis by using PCR technology. subC gene was first cloned in pRS316 E.co/z-yeast shuttle plasmid, then sub-cloned to pHV1431 E.coli-Bacillus shuttle vector, and transferred into nine host Bacillus species. Thereafter, the influence of the host Bacillus species on recombinant SAP production on a defined medium was investigated; among Bacillus species overall SAP activity on substrate value was the highest for recombinant B.licheniformis. In the second phase, a mass flux-balance based stoichiometric model for B.licheniformis for SAP fermentation process has been set up. The model considers 147 reaction fluxes, and there are 105 metabolites that are assumed to be in pseudo-steady state. Thereafter, the variation in intracellular reaction rates of recombinant Bacillus species and r-B.licheniformis found to be suitable host for SAP production in a defined medium. In the third phase an experimental method was developed to determine the intracellular metabolite concentrations. In the forth phase, due to the intracellular valine limitation effects of alanine group amino acids on SAP production were investigated and valine supply increased production considerably. In the last phase, in molasses based complex medium SAP production performance of the host Bacillus species were investigated and the highest enzyme activity was obtained with B.subtilis pHV1431::subC; thereafter effects of oxygen transfer conditions were investigated by r-B.subtilis. Lastly, complex medium was modified and a protein based complex medium was designed and production was optimised.
Anahtar Kelime: Konular:
Erişim Türü: Erişime Açık
| APA | ÇALIK P (2003). Serin alkali proteaz üretiminde hücreiçi darboğazların belirlenmesi ve prosesin geliştirilmesi. , 1 - 62. |
| Chicago | ÇALIK Pınar Serin alkali proteaz üretiminde hücreiçi darboğazların belirlenmesi ve prosesin geliştirilmesi. (2003): 1 - 62. |
| MLA | ÇALIK Pınar Serin alkali proteaz üretiminde hücreiçi darboğazların belirlenmesi ve prosesin geliştirilmesi. , 2003, ss.1 - 62. |
| AMA | ÇALIK P Serin alkali proteaz üretiminde hücreiçi darboğazların belirlenmesi ve prosesin geliştirilmesi. . 2003; 1 - 62. |
| Vancouver | ÇALIK P Serin alkali proteaz üretiminde hücreiçi darboğazların belirlenmesi ve prosesin geliştirilmesi. . 2003; 1 - 62. |
| IEEE | ÇALIK P "Serin alkali proteaz üretiminde hücreiçi darboğazların belirlenmesi ve prosesin geliştirilmesi." , ss.1 - 62, 2003. |
| ISNAD | ÇALIK, Pınar. "Serin alkali proteaz üretiminde hücreiçi darboğazların belirlenmesi ve prosesin geliştirilmesi". (2003), 1-62. |
| APA | ÇALIK P (2003). Serin alkali proteaz üretiminde hücreiçi darboğazların belirlenmesi ve prosesin geliştirilmesi. , 1 - 62. |
| Chicago | ÇALIK Pınar Serin alkali proteaz üretiminde hücreiçi darboğazların belirlenmesi ve prosesin geliştirilmesi. (2003): 1 - 62. |
| MLA | ÇALIK Pınar Serin alkali proteaz üretiminde hücreiçi darboğazların belirlenmesi ve prosesin geliştirilmesi. , 2003, ss.1 - 62. |
| AMA | ÇALIK P Serin alkali proteaz üretiminde hücreiçi darboğazların belirlenmesi ve prosesin geliştirilmesi. . 2003; 1 - 62. |
| Vancouver | ÇALIK P Serin alkali proteaz üretiminde hücreiçi darboğazların belirlenmesi ve prosesin geliştirilmesi. . 2003; 1 - 62. |
| IEEE | ÇALIK P "Serin alkali proteaz üretiminde hücreiçi darboğazların belirlenmesi ve prosesin geliştirilmesi." , ss.1 - 62, 2003. |
| ISNAD | ÇALIK, Pınar. "Serin alkali proteaz üretiminde hücreiçi darboğazların belirlenmesi ve prosesin geliştirilmesi". (2003), 1-62. |
